伍文定，字時泰，湖北松滋人。臂力過人，擅長騎馬、射箭，議論事情慷慨激昂。當初做常州推官，辦事精明、勤快，很會斷案，被稱為強幹的小吏。魏國公徐俌與百姓爭搶田地，文定把田判給了百姓，劉瑾得到徐俌送的重禮後，就製造大案，巡撫艾朴以下十四個人都被逮捕了，文定已經升調為成都同知，也被抓進京城的大牢中，結果被罷官為民。劉瑾敗亡以後，他重新起用到嘉興做官。
江西姚源的盜賊王浩八等，流竄到浙江開化搶劫，都御史俞諫傳令讓文定與參將李隆、都指揮江洪、僉事儲珊一起討伐他，駐軍華埠。而都指揮白弘與湖州知府黃衷另外在馬金紮營，盜賊劉昌三攻破營寨，活捉了白弘，官軍受到了很大打擊。浩八攻打華埠，江洪、文定打敗了他，追到孔埠，李隆、儲珊也追到池淮，破壞了敵人的巢穴，接着又進攻淫田。江洪率奇兵深入敵區，中了盜賊的奸計，與指揮張琳等都被俘。文定等將因為殿後得以生還，盜賊也就此逃回江西去了，俞諫等把文定忠於職責、勇敢作戰的事跡上報朝廷後，朝廷詔令主管部門對他加以獎勵。後來他升任河南知府，設計擒獲了大盜張勇、李文簡，因為才幹優裕，能幹大事，所以調往吉安。期間又定計平定了永豐和大茅山的盜賊，後來，又幫助巡撫王守仁平定了桶岡、橫水。
宸濠叛亂發生後，吉安的百姓、士紳們爭先恐後地逃跑或躲藏，文定把逃亡的斬了一個，群眾才安靜下來。然後他把守仁迎入城中，知府刑王旬、徐璉、戴德孺等先後到來，一起討伐宸濠，由文定當大將。文定親身冒着箭頭和滾石的威脅向前，大火燒着鬍鬚也不退後一步，宸濠之亂被平定，他戰功最大，被提升為江西按察使，張忠、許泰到南昌，想頂他的戰功，而守仁已經拿獲宸濠帶到浙江去了，張忠等失望後非常惱恨，文定出來拜見，就把他給綁了，文定罵道「：我不顧誅殺九族為國家平定反賊，有什麼罪？你們是天子的心腹，侮辱國家的忠臣義士，為反賊報仇，依法該斬了你們。」張忠更加惱火了，就把文定棰倒在地上，文定後來上書皇帝請求解職，武宗沒有回答他。
不久，他升任廣東右布政使，尚未赴任，世宗皇帝即位，他上書檢舉張忠等人的罪狀，並且說：「過去張忠、許泰與劉暉到江西來，張忠自稱是天子的弟弟，劉暉自稱天子的兒子，許泰自稱威武副將軍，與天子是同僚。他們侮辱朝廷命官，誣害善良百姓，提出千萬般要求，侵奪了百萬餘資財，致使江西到處是餓死的屍首，盜賊洶洶而起。現在即使一刀刀割了他們三個，也不足以向江西百姓謝罪。現今首惡江彬、錢寧都已經法辦了，這三個人實際上是他們的黨羽。請趕快殺了他們，用以顯示法律的威嚴！」又請求把沒收宸濠的資產，發還給江西，作為建設江西的費用，慎重地清理冤案，釋放張忠、許泰所陷害的無罪者，及寧王家族中沒參加陰謀反叛的人員。世宗一併採納了他的建議。
評定功績，文定升為右副都御史，負責督辦操江事務。討伐海盜，拿獲了董效等二百多人，世宗頒發敕令獎勵了他，不久因病請回家療養去了，六年後應召入京，做了兵部右侍郎，升為右都御史，代胡世寧主持都察院的事務。
雲南的少數族人首領安銓造反，打敗了參政黃昭道，攻佔了尋甸、嵩明。武定的民族首領鳳朝文也起來造反，殺害了同知以下的官吏，與安銓聯合起來包圍雲南。世宗詔令加封文定為兵部尚書兼前職，讓他統轄雲南、四川、貴州、湖廣的軍隊討伐叛亂者，讓侍郎梁材督理軍餉。正好芒部叛亂酋長沙保的兒子普奴也興兵作亂，朝廷一併交由文定來鎮壓。文定沒到雲南，安銓等已經被巡撫歐陽重打敗，於是文定調頭去征伐普奴，左都御史李承勛極力說四川、貴州破缺不堪，不應當再動兵，於是召文定回京提督京營。文定到湖廣，上書請假回家祭祖。
過後，四川巡按御史戴金又上書說「叛賊作亂開始的時候，大勢頭還可以招安。可是文定打定主意要進軍，完全不珍惜機會。大車大馬運輸糧草，白白浪費了幾十萬石。等朝廷詔書命令作罷時，他還不肯停下來。又盡力述說土酋阿濟等的罪過，使得當地軍民紛紛傳言，差一點又出個亂子。我認為文定應當治罪。」尚書方獻夫、李承勛藉此詆毀文定好大喜功，勞民傷財，於是命
