增加到第四周的1，0680&nbp;±1218&nbp;（&nbp;p&nbp;<001），這表明pd-1&nbp;在我們模型中的d&nbp;中具有潛在作用。
在脾臟和骨髓中，隨着腫瘤的發展，d的比例也顯著增加，其模式與腫瘤組織和外周血中的d相同。此外，我們在tb小鼠中觀察到明顯的脾腫大，這與我們觀察到的d在脾內聚集一致。
為了確定局部照射對腫瘤生長和d的影響，當腫瘤直徑達到75&nbp;時，我們使用大分割rt(20&nbp;gy/f)治療皮下腫瘤。放療導致腫瘤進展延遲長達一周，在第7至第10天的最小體積約為500&nbp;3，但此後腫瘤開始再生。根據放療前後腫瘤生長曲線，我們選擇放療後第3天為再生前生長，放療後1周為腫瘤體積最小時為再生開始，放療後2周和3周為再生階段。腫瘤組織蘇木精-伊紅染色顯示，與未治療的腫瘤相比，放療後的腫瘤中有更多的浸潤性炎症細胞。隨後的d11b特異性免疫組化染色顯示，大多數炎症細胞是d11b+髓系細胞，這表明局部照射可能導致d的積累。為了證實我們的假設，我們在局部照射後的不同時間點對總d和這兩個亞群進行了流式細胞術分析。局部照射後，放療後腫瘤浸潤d的比例比未治療腫瘤高2倍(trv&nbp;rt=2133±329&nbp;v&nbp;4410±300，p<0001)。pn-d與總d具有相同的增加趨勢(trv&nbp;rt=1637±247&nbp;v&nbp;3866±424，p<0001)，而-d比例保持在約01，且與腫瘤大小和治療無關。外周血情況同腫瘤組織。
為了確定受照射腫瘤中pn-d&nbp;的逐漸積累是否有助於&nbp;腫瘤的再生長，或者這種積累是否僅僅是腫瘤生長的結果，使用抗y-6g&nbp;單克隆抗體來消耗d&nbp;抗y-6g抗體的應用顯着降低了腫瘤部位和外周血中pn-d的頻率（p<005）。此外，用抗&nbp;y-6g&nbp;抗體治療大大延遲了照射後的再生，這表明pn-d的募集對腫瘤再生至關重要。
雖然pn-d利用一系列機制來抑制抗腫瘤免疫反應，這涉及到許多免疫細胞和細胞因子，但對d8+t細胞的抑制無疑是最重要的。為了確定rt&nbp;後&nbp;pn-d&nbp;誘導的免疫抑制是否依賴於d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞，我們通過流式細胞術評估了d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞的數量和功能。
如圖3d&nbp;所示，d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞的百分比隨着照射從1171±&nbp;231下降到242&nbp;±062(p<001)。pn-d耗竭逆轉了這種下降（&nbp;rt&nbp;+&nbp;anti-y-6g&nbp;抗體=&nbp;242&nbp;±062&nbp;v&nbp;2012&nbp;±392，p<001）。為了更好地了解d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞浸潤腫瘤部位的功能狀態，我們測量了d8+&nbp;t&nbp;細胞內部和表面上ifn-γ、d28&nbp;和&nbp;pd-1&nbp;的表達。局部&nbp;rt&nbp;顯着降低了&nbp;d8&nbp;+t&nbp;細胞分泌&nbp;ifn-γ的比例，從3306&nbp;453降至1325&nbp;208，並增加了表達&nbp;pd-1&nbp;的&nbp;d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞的比例（trv&nbp;rt=25320±&nbp;5703&nbp;au&nbp;v&nbp;53880&nbp;±9876）&nbp;au，p<005）。
d28&nbp;表達未觀察到顯着變化。當抗y-6g抗體被給予輻照小鼠時，ifn-γ分泌達到與未處理的&nbp;&nbp;小鼠相同的水平（2974±355），而與輻照小鼠進行比較抗y-6g抗體處理後的pd-1&nbp;表達沒有變化小鼠。因此，在這部分我們建議pn-d&nbp;通過抑制d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞促進放療後腫瘤的再生。pn-d&nbp;不僅抑制了te&nbp;中&nbp;d8&nbp;+&nbp;t&nbp;細胞的數量，而且還抑制了其活性。
為了確定輻照誘導d的抑制機制，我們進行了免疫組化染色及和arg1活性檢測。腫瘤切片的免疫組化染色顯示，局部rt增強了arg1的表達，但沒有增強的表達。arg1活性測定表明，局部照射顯著提高了arg1的活性，從040015&nbp;u/提高到378&nbp;039&nbp;u/&nbp;((p<001)。相比之下，n熒光標記的活性檢測顯示，輻照和未處理的腫瘤組織樣本的熒光強度相似。
pd-1的表達是d&nbp;的一種新型免疫抑制機制。然後我們詢問pd-1&nbp;上調是否是rt&nbp;後&nbp;d&nbp;介導的免疫抑制的機制之一。通過流式細胞術分析輻照後d&nbp;中&nbp;pd-1&nbp;的表達。圖4e&nbp;顯示，與未處理組相比，受照射腫瘤的d&nbp;中的pd-1&nbp;表達在照射後不久顯着增加（照射後第三天trv&nbp;rt=4439&nbp;±1753&nbp;au&nbp;v&nbp;13280&nbp;±3243&nbp;au，p<005）然而，此後pd-1表達繼續下降，局部照射組在照射後第3周顯着低於未治療組（tr&nbp;v&nbp;rt=1，4650±&nbp;3996&nbp;au&nbp;v&nbp;4075±1648&nbp;au，p<005）。外周血中d&nbp;的&nbp;pd-1&nbp;表達與局部腫瘤部位的表達趨勢相同。
以上數據表明arg1表達的上調是照射後pn-d抑制功能的合理機制。然而，不涉及&nbp;pd-1&nbp;和&nbp;的調節。為了進一步證實這一假設，在輻射後通過灌胃給予arg1&nbp;抑制劑nr-nha。10&nbp;g/g/d&nbp;nr-nha&nbp;有效地將arg1&nbp;活性從378&nbp;039&nbp;u/&nbp;降低到202&nbp;025&nbp;u/（p<001）。
rt後給予nr-nha顯着增加d8+t細胞比例（rt&nbp;v&nbp;rt+nr-nha=242062&nbp;v&nbp;614&nbp;064，&nbp;p<001），並伴有腫瘤再生延
765.隱蔽、狡猾、善變
